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菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

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菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

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回答菌種保存的方法有斜面低溫保藏法、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法、濾紙保藏法、甘油管保存法、冷凍干燥保存法 。1、斜面低溫保藏法：將菌種接種到適合的固體斜面培養基上 ， 用油紙將棉塞部分包扎好 ， 然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存 。2、液體石蠟覆蓋保藏法：使用液體石蠟將斜面菌覆蓋住 ， 使其和空氣隔絕 。
一、菌種保存的方法有哪些
1、斜面低溫保藏法
（1）將菌種接種到適合的固體斜面培養基上 ， 等到菌種充分生長過后 ， 使用油紙將棉塞部分包扎好 ， 然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存 。
（2）如果是霉菌、放線菌及有芽孢的細菌 ， 一般可以保存2-4個月左右 ， 需要移種一次 。如果是酵母菌 ， 一般可以保存2個月左右 ， 需要每個月移種一次 。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
（1）將液體石蠟裝在三角燒瓶中 ， 并使用棉塞塞好 ， 用牛皮紙進行包扎 ， 然后在0.1MPa ， 121.3℃的環境下滅菌30分鐘左右 ， 接著將其放置在40℃的溫箱之中 ， 將水汽蒸發掉 。
（2）將需要保藏的菌種 ， 用適合的斜面培養基進行培養 ， 得到健壯的孢子或者是菌體 。
（3）使用滅菌過的吸管將液體石蠟吸出 ， 注入斜面上 ， 用量為高出斜面頂端1cm左右為宜 。
（4）將試管直立 ， 放置在低溫或者是室溫之下進行保存 。
（5）霉菌、放線菌、芽孢細菌可以保藏2年以上不死 ， 酵母菌可以保藏1-2年 ， 一般無芽孢細菌可以保藏1年 ， 腦膜炎球菌可以保藏3個月左右（37℃環境下） 。
3、沙土保藏法
（1）準備好河沙 ， 加入10%稀鹽酸 ， 然后加熱煮沸30分鐘左右 ， 將里面的有機質去掉 ， 然后將酸水倒掉 ， 用自來沖洗至ph為中性 ， 接著烘干 ， 過篩（40目篩子） ， 去掉粗顆粒 。
（2）準備好非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土 ， 浸泡洗滌數次 ， 直至ph為中性 ， 然后烘干 ， 碾碎 ， 過篩（100目篩子） ， 去掉粗顆粒 。
（3）將沙和土按照2：1的比例混合 ， 裝入試管或者是安瓿管中 ， 塞好棉塞 ， 在1212℃的環境下滅菌30分鐘左右 。
（4）將菌種在斜面培養基中培養 ， 得到健壯的菌體 ， 然后向斜面培養物中注入3-5ml無菌水 ， 洗下細胞或孢子制成菌懸液 。
（5）使用滅菌過的吸管吸取菌懸液 ， 然后均勻滴入沙土管中（0.2-0.5ml/管） 。如果是放線菌或霉菌 ， 可以直接挑取孢子拌入沙土管中 。
（6）真空抽去沙土管中的水分 。
（7）將沙土管用火焰熔封 ， 然后存放在低溫(4-6℃)干燥處保藏 ， 或者是將沙土管用牛皮紙或塑料紙包好 ， 放置在干燥器內保存 。保存期間 ， 每隔6個月左右檢查一次菌種存活性 。
4、濾紙保藏法
（1）準備好濾紙條（0.5×1.2cm） ， 安瓿管（0.6×8cm） ， 然后每個安瓿管放置1-2張濾紙條 ， 塞上棉塞 ， 在0.1MPa ， 121℃的環境下滅菌30分鐘左右 。
（2）將菌種在適合的斜面培養基上培養 ， 得到健壯的菌體 。
（3）在滅菌培養皿中滴加1-2ml的滅菌脫脂牛乳 ， 并取數環菌苔在牛乳內混合均勻 ， 制成濃懸液 ， 然后使用鑷子從安瓿管中取出濾紙條 ， 浸入菌懸液中 ， 吸飽后 ， 放回安瓿管中 ， 塞上棉塞 。

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