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回答1、LB培養基制備：準備10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化鈉，加入800ml去離子水，拌勻，直至完全溶解，然后用0.2ml氫氧化鈉（5mol/L）將ph調節到7.4，并加入1L去離子水，高壓蒸汽滅菌 。2、倒平板：培養基放置在60℃水浴鍋中保溫，取出后，輕輕轉動培養基，讓瓊脂分布均勻 。
一、甘油菌菌種活化步驟
1、LB培養基制備
（1）準備10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化鈉，然后加入800ml去離子水，攪拌均勻，直至完全溶解，接著使用0.2ml的氫氧化鈉（5mol/L）將ph調節到7.4左右，并加入1L的去離子水，高壓蒸汽滅菌20分鐘左右 。
（2）在高壓滅菌之前，應當加入15g/L（鋪制平板用）或7g/L（配制頂層瓊脂糖用）的瓊脂糖 。
2、倒平板
（1）超凈臺、接種環、培養皿，酒精燈等用紫外線滅菌30分鐘左右 。
（2）高壓滅菌后的培養基放置在60℃的水浴鍋中保溫，等到溶液尚未冷卻的時候，將培養基取出，輕輕轉動，讓瓊脂均勻分布在培養基溶液中 。
（3）等到冷卻至50℃的時候，在超凈臺中加入抗生素，并旋轉將培養基混合均勻，然后從燒瓶中傾出培養基鋪制平板 。
（4）將甘油菌凍存管放在冰上，直接用接種環在凍存管內的冰渣上蘸一下，然后涂上平板 。
3、大量培養
（1）將冷藏的液態培養基重新高溫高壓滅菌，等到冷卻至50℃的時候，加入抗生素，接著將菌落挑至已經加入抗生素的液態培養基中（2-5ml），37℃，200rpm培養8小時左右 。
（2）按照1：500-1000的比例，將添加了抗生素的液態LB培養基稀釋上一步驟所得菌液（20-25μL菌液+25ml液態LB培養基），37℃，200rpm培養12-16小時 。
二、甘油菌怎么保存
1、如果是20%甘油保存菌種（甘油：菌液=20：80），一般放置在零下70℃的環境下保藏 。
【甘油菌菌種活化步驟，甘油菌怎么保存】2、如果是一般細菌的菌種，在純化后，接種在普通肉湯管中，然后經過4-6小時增菌后，放入適量甘油-生理鹽水保存液，在零下20℃的環境下進行保藏 。如果是鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌種，在純化后，接種在血清肉湯管中，在5-10%CO2中經過8-10小時增菌后，加入適量甘油-生理鹽水保存液，放置在零下80℃的環境下進行保藏 。如果是真菌菌種，在純化后，直接取菌洗入肉湯，加入甘油-生理鹽水保存液，放置在零下20℃的環境下進行保藏 。
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