根據特征性病理變化和3-5日齡以內的初生仔豬大批發?。?泄瀉黃色水樣稀糞，剖檢腸黏膜有急性卡他性炎癥 ， 就可作出初步診斷；確診可進行實驗室檢查 ， 除采用涂片鏡檢、分離培養和生化試驗等常規方法外，還應測定其有無腸毒素及吸著因子 。
若從病死豬腸內容物和糞便中分離出致病性大腸桿菌，而且證實大多數菌株具有黏著素K抗原和能產生腸毒素 ， 則可確診 。
腸毒素的測定方法很多，有兔腸段結扎試驗、小鼠腸袢試驗、皮膚毛細血管通透性亢進試驗、乳鼠灌胃試驗、細胞培養、Y1腺瘤細胞和中國倉鼠卵巢(CHO)細胞的形態變化測定、瓊脂擴散(Elek)法、被動免疫溶血法、ELISA、基因探針法等 。
兔腸段結扎試驗和小鼠腸袢試驗使用廣泛 ， 是普遍使用的測定腸毒素活性的好方法 ， 但操作較繁瑣 。
乳鼠灌胃試驗是目前測定ST的唯一方法 。
基因探針法很敏感，是目前最先進的方法，但因標記DNA的探針半衰期短，價格貴，不易推廣 。
【仔豬黃痢臨床癥狀 仔豬黃痢確診方法】ELISA很敏感 ， 易于推廣 。
