為了貫通落實《鄉村振興戰略規劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效對付非洲豬瘟疫情的嚴重威脅，2019年6月22-23日，農業農村部種業管理司組織地方豬遺傳材料采集保存工作相關科研工作者召開會議，通報《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》 。云南農業大學魏紅江教授受邀參加，并作了題為“家畜成纖維細胞制作和體細胞克隆技術在保種上的應用”的學術報告 。
會議通報《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》(農種畜函[2019]14號)，擬采集制作61個國家級保種場、保護區內國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料 ， 并建成國家級地方豬遺傳材料信息數據庫 。云南農業大學與江西農業大學豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室將協助全國畜牧總立制定遺傳材料采集技術規范 ， 并進行技術指導 。魏紅江教授的科研團隊發明性地把體細胞克隆技術應用到了地方家畜品種的種質資源保護上，曾凍存來自云南、內蒙古、西藏等地區的家畜地方品種耳組織成纖維細胞，并通過對瀕于滅絕的生存于烏蒙山一帶的烏金豬黃毛系個體 ， 利用體細胞克隆技術進行地方家畜品種的保存 。目前，超細型絨山羊、烏金豬黃毛系、烏骨綿羊的克隆個體均已繁殖出后代 。上述主意可服務于我國地方豬遺傳材料保存工作，為地方家畜品種種質資源的保護與利用提供理論和技術支撐 。
農業農村部種業管理司關于印發《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》的通知
農種畜函〔2019〕14號
各省、自治區、直轄市農業農村(農牧)、畜牧獸醫廳(委、局) ， 新疆生產建設兵團農業農村局、黑龍江省農墾總局，各有關單位:
為貫通落實《鄉村振興戰略規劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效對付非洲豬瘟疫情的嚴重威脅 ， 農業農村部種業管理司決心開展國家級地方豬遺傳材料采集保存工作 。現將《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》印發你們，請按照方案請求，詳細抓好相關任務措施落實 。如有不可抗力等有關情況，及時向我司畜禽種業處、全國畜牧總立反饋 。
聯系人及電話：
種業管理司畜禽種業處 周曉鵬 010—59193287
全國畜牧總立畜禽資源處 張桂香 010—59194625
農業農村部種業管理司
2019年6月17日
國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案
為貫通落實《鄉村振興戰略規劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》，有效對付非洲豬瘟疫情對地方豬遺傳資源的嚴重威脅，加快國家級地方豬品種遺傳材料采集和保存，提高地方豬遺傳資源保護能力，維護地方豬遺傳資源的系統性和盡整性，制定本方案 。
一、目的意義
我國地方豬遺傳資源具有抗逆性強、耐粗飼、繁殖率高、肉質優良等特性，利用地方豬遺傳材料開展育種工作，有利于提高生豬種業競爭力，發展特色畜牧業 ， 滿意城鄉居民多樣化、高品質消費需求 。當前非洲豬瘟防控形勢重雜嚴重，對地方豬遺傳資源安全造成重要威脅 。采用超低溫寒凍技術 ， 采集保存我國地方豬品種的DNA、精液、體細胞及腸道菌群等遺傳材料，是對付非洲豬瘟疫情威脅 ， 豐富地方豬品種保護手段，盡善家畜遺傳資源保種體系，推動生豬種業健康可持續發展的重要途徑 。
二、主要任務
(一)采集制作遺傳材料
采集制作61個國家級保種場、保護區內國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料(見附件1) 。每個地方豬品種收集不少于120份耳組織樣(>2克/份);每個品種制作寒凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或者7500劑(0.5mL細管);每個品種制作體細胞系不少于222份(每份1mL)：每個品種收集不少于120份健康后備豬清新糞便樣品 。
(二)構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫
在采集遺傳材料的同時，收集供體出生日期、三代以內系譜信息、性能測定等表型記錄數據 ， 構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫 。
三、任務分工
(一)全國畜牧總立 。具體組織項目實施，制定遺傳材料采集制作和驗收標準，在江西農業大學、云南農業大學等單位協助下開展技術培訓 ， 進行督導檢查與驗收 ， 集中保存遺傳材料，收集匯總記錄檔案 。指導中國農業大學構建采集遺傳材料信息數據庫，做好數據庫運行和維護等工作 。
(二)保種場(保護區) 。協助開展遺傳材料采集和制作，和病毒、細菌檢測等工作，協助提供供體三代以內系譜(需簽字蓋章)、生產性能測定等數據和正面、側面數碼照片各1張 。
(三)遺傳材料制作單位 。江西農業大學、云南農業大學等遺傳材料采集制作單位 ， 與全國畜牧總立簽訂安全和保密允諾書，采集制作遺傳材料并開展病毒、細菌等檢測(見附件2、3)，提供檢測報告或者相關證明材料，填報相關數據(見附件4、5、6、7) ， 按期將制作產品輸送至國家級家畜基因庫保存 。
江西農業大學豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室和云南農業大學協助全國畜牧總立制定遺傳材料采集技術規范，進行技術指導，備份采集的遺傳材料 ， 定期向全國畜牧總立書面匯報工作發展 。
四、進度調度
1月至6月中旬：制定實施方案，明確參加遺傳材料采集單位的任務，與有關單位簽訂購買服務合同 。
6月下旬：舉辦國家級地方豬遺傳材料采集制作培訓班，全面啟動相關工作 。
6月下旬至12月：開展遺傳材料采集制作及入庫保存工作 。對各制作單位收集制作遺傳材料進行質量抽查 。
12月底：各遺傳材料制作單位提交項目執行情況等總結報告 。
五、保障措施
(一)加強組織領導 。農業農村部種業管理司盡職總體統籌協調，省級農業農村主管部門踴躍協調配合本轄區內工作 。全國畜牧總立牽頭組織實施，省級畜牧技術推廣機構、遺傳材料制作單位和國家級地方豬保種場(保護區)、地縣農業農村部門、各級種業管理系統等通力協作、密切配合，確保高效盡成工作 。
(二)規范開展工作 。加強對制作單位和保種場(保護區)的培訓指導，強化項目參加人員、遺傳材料、數據信息等管理，保證遺傳材料質量與生物安全 。明確所收集遺傳材料的所有權、使用權等 ， 相關專項成績等按照國家法律法規及相關規定實現共享 。
(三)嚴厲經費使用管理 。承擔單位應加強項目經費管理，建立健全內審機制，?？顚Ｓ?nbsp;， 明確經費預算、使用范圍，嚴厲按照預算支出 。項目組織實施單位會同地方主管部門，定期不定期對項目單位的資金使用情況、執行進度等進行督導 ， 保障項目規范有序實施 。
附件：
1.任務分工表
2.國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案
3.疫病檢測清單
4.遺傳材料采集供體登記表
5.精液采集和制作記錄表
6.體細胞制作記錄表
7.國家級家畜基因庫樣品采集記錄表
附件2
國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案
一、精液寒凍保存
(一)數量請求
每個保種場(保護區)的每個品種保存寒凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或7500劑(0.5mL細管)，公豬不少于6頭 ， 涵蓋所有家系 ， 每個個體保存寒凍精液不少于800劑(0.25mL)或400劑(0.5mL) 。
(二)供體請求
符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系，系譜清晰;健康、必檢疾病為陰性 。
(三)細管標記及包裝
應在細管上標明保種場(保護區)建設單位代碼、品種代碼、供體號和生產日期 。保種場(保護區)建設單位代碼用漢語拼音大寫首字母表示，品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母 ， 生產日期按年月日次序羅列，年月日各占二位數字，年度的后兩位數組成年的二位數，月、日不夠二位的，月、日前分辭加“0”補充為二位數 。
CQXK為重慶畜牧科學院代碼，RCZ為榮昌豬的品種代碼，11003為該公豬號，120525為2012年5月25日的生產日期 。
細管裝入指形管 ， 指形管上標記供體豬號、寒凍精液數量及生產日期 。再用滅菌紗布袋將裝有寒凍精液的指形管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝一頭豬的寒凍精液，并有標簽附在紗布袋上，放入液氮中保存 。紗布袋標簽請求標記如下內容：袋號、品種、供體豬號、寒凍精液數量、解凍后精子的活力 。
(四)質量檢測
1. 抽樣數量及請求
抽取總樣本量的2%進行質量檢測，檢測合格率請求達到80%以上 。
2. 指標
(1)0.25mL劑型寒凍精液
每支劑量≥0.18mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數≥2.5×107;每支細菌菌落數≤800個 。
(2)0.5mL劑型寒凍精液
每支劑量≥0.40mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數≥5.0×107;每支細菌菌落數≤1600個 。
二、體細胞寒凍保存
(一)數量請求
每個保種場(保護區)的每個品種公豬不少于12頭，涵蓋所有家系;母豬不少于25頭 ， 每個個體體外培育原代或第1代細胞6管 ， 每管1mL，用1.5mL或2.0mL凍存管包裝，細胞密度為1×105/mL以上 。
(二)供體請求
符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系，系譜清晰;健康、必檢疾病為陰性 。
(三)寒凍管標記及包裝
凍存管上標記編號、品種漢語名稱或代碼，細胞名稱或代碼、性辭、培育代數、凍存日期 。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管，并有標簽附在紗布袋上 ， 放入液氮中保存 。紗布袋標簽標伎捶種、供體豬號、凍存管數量 。
(四)質量檢測
1.抽樣數量 。抽取總樣本量的4%進行質量檢測 ， 檢測合格率請求達到70%以上 。
2.指標 。細胞密度不低于1×105個/mL;細胞活力80%以上;支原體檢測為陰性 。
三、耳組織及基因組DNA樣寒凍保存
每個保種場(保護區)每個品種采樣數量40頭(對所有公豬家系所有進行采樣，繁殖公豬、繁殖母豬各1頭，和后備公豬和后備母豬各1頭，且后備豬避免全同胞關系) 。每個品種每個個體采集3份耳樣，每份耳組織樣不少于2克(用2 ml凍存管保存)，凍存管上詳細標注品種、耳號、性辭、采樣日期、場地等關鍵信息 。耳樣采集后立即置于液氮中保存 。
四、腸道菌群寒凍保存
(一)數量請求
每個保種場(保護區)每個品種公豬不少于10頭 ， 母豬不少于50頭，每頭豬采集糞便樣本2份(每份2克) 。
(二)供體請求
60日齡后備豬，符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系 ， 系譜清晰;近一個月沒有使用抗生素、食欲正常、體重達該品種60日齡階段標準 。
(三)凍存管標記及包裝
凍存管上標記編號、品種漢語名稱、性辭、采樣日齡、采樣日期 。
(四)采樣請求和主意
1.采樣請求
(1)每頭豬采集清新糞便樣本2份(每份2克)，其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL凍存管取1克清新糞便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保護液中，液氮或-80℃保存 。
(2)采樣用凍存管請求無菌，配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護液無菌 。
(3)從肛門采集清新糞便樣品，采樣時每頭豬要更改新的手套，防止交織污染 。
2.糞便樣品采集和保存主意
(1)采樣前準備 。①2 mL和5 mL凍存管高壓滅菌(或直接購買無菌凍存管);②配置75%乙醇;③寒凍保護液配置：以配置100mL保護液為例：無菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖，混勻、定容到100 mL 。④液氮或干冰;⑤另外耗材：一次性手套、紙巾等 。
(2)樣品采集 。①固定采樣豬，用紙巾和75%乙醇擦洗肛門;②換上一次性手套 ， 從肛門采集糞便樣品;③從采集的糞便頭中，取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管，擦拭潔凈凍存管，在管壁標記耳號、性辭、采樣如期和年齡，立即投入液氮中;④另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護液的凍存管中，混勻，在管壁標記耳號、性辭、采樣如期和年齡，投入液氮中 。⑤在液氮中保存 ， 或送至實驗室后轉移到-80℃ 。⑥樣品運輸郵寄可用干冰 。
【保種！農業農村部印發“國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方】
